Estudios macromoleculares y estabilidad térmica de proteínas

Abstract

RESUMEN: Los estudios biofísicos con proteínas requieren de ciertos ensayos preliminares, usando técnicas y procedimientos habituales en estudios de caracterización de proteínas, cuyo fin es estudiar su estado y comportamiento. Nuestros estudios están centrados en la proteína lisozima en tampón acetato sódico, pH 5. Se determinó la concentración, actividad y el coeficiente de extinción molar de lisozima en estas condiciones mediante técnicas espectrofotométricas. La actividad y características de esta proteína la hacen idónea para analizar su estabilidad térmica mediante fluorescencia y calorimetría diferencial de barrido. Estos estudios han permitido evaluar el carácter reversible del desplegamiento térmico de lisozima y obtener los valores de los parámetros termodinámicos de este proceso. Se demostró igualmente la presencia de sólo dos estados mayoritarios (nativo y desnaturalizado) en equilibrio, así como la temperatura en la que las poblaciones de ambos estados son iguales, o temperatura de la transición.

ABSTRACT: Biophysics studies on proteins require some specific preliminary assays using standard techniques and procedures in characterization studies. The purpose was to study it's state and behaviour. Our subject is focused on the lysozyme protein in sodium acetate buffer, pH 5. Protein concentration, enzymatic activity and molar extinction coefficient were determined by spectrophotometric techniques under these experimental conditions. The activity and characteristics of this protein are adequate to analyze its thermal stability by fluorescence spectroscopy and differential scanning calorimetry (DSC). These studies have made it possible to evaluate the reversible character of the lysozyme thermal unfolding as well as obtain the thermodynamic parameters values from this process. The presence of only two major states (native and denatured) in equilibrium as well as the temperature on which populations from both states are equal, also named as transition temperature, was examined.